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生物学的バッファを選択する際に考慮しなければならない5つの要素

タンパク質の化学と分子生物学の発展に伴い、さまざまな病気の治療のためのタンパク質賞薬の研究と応用は、生物医学産業の発展のホットスポットになっています。また、ポリペプチドおよびタンパク質薬には、副作用がほとんどなく、強い活動があり、症状と根本原因の両方を治療する効果があります。タンパク質を精製するとき、最も重要なことは、精製プロセス中にタンパク質を不活性化しないように保つこと、または精製プロセスによって引き起こされるタンパク質活性の損失を最小限に抑えることです。したがって、バッファーを設計する際には、pH値、バッファーシステム、塩イオン、還元剤、安定剤を考慮する必要があります。

PH値

多くの実験では、生物学的条件を模倣するためにpH値を7.4に設定していますが、この条件下で標的タンパク質が不安定な場合は、それを溶液に溶解し、分解しないようにするためにpH値を変更する必要がある。溶液のpH値がタンパク質の等電点plに近い場合、この時点でタンパク質表面に正味の電荷がないため、溶液に溶解するのが困難になります。だからそれは骨积み立てやすいです。 ExPASy WebサイトのProtParamツールを使用して、タンパク質配列を提出する限り、タンパク質等電点のpl値を迅速かつ簡単に計算できます。

バッファシステム

まず第一に、選択されたバッファーシステムが設定されたpH値でバッファー容量を持っていることを確認する必要があります。そして、その解離定数pKa値は、設定されたpH値の上下の1単位以内でなければなりません。さらに、バッファ溶液の濃度が実際のバッファ溶液の機能を達成するのに十分高いことを保証することである。一般に、選択された濃度は20〜100mMである。使用される緩衝系はタンパク質の活性に影響を与えることができないことに注意すべきであり、例えば、リン酸はキナーゼの活性を阻害することができるので、反応前に完全に透析されるべきである。

さらに、いくつかの緩衝系は、Tris − HCL緩衝液などの温度に非常に敏感である。緩衝系を25 ℃ でpH8に調整すると、そのpHは5 ℃ で8.58に上昇し、37 ℃ で7.71に低下します。したがって、実験が25 ℃ で行われない場合、このpHは実験条件では適用できない可能性があると考える必要があります。

塩

多くのバッファーには、タンパク質の溶解性を維持し、生理学的条件をシミュレートするのに役立つNaClが含まれています。濃度は一般的に150mMであるが、異なるタンパク質精製ステップでは異なる塩イオン濃度が必要になる場合がある。イオン交換クロマトグラフィーは、一般に、低塩結合および高塩溶出を特徴とする。結合するときは、塩イオンがタンパク質と競合して高イオン強度でフィラーと結合するのを防ぐために、塩濃度を下げる必要があります。タンパク質がイオン交換カラムを流れるのを防ぎ、カラムが標的タンパク質に結合できるようにします。疎水性クロマトグラフィーは、一般に、高い塩結合および低い塩溶出を特徴とする。

抑制剤

標的タンパク質がシステイン残基を含む場合、残基間の酸化が起こり、タンパク質の凝集につながる可能性があります。これを防ぐために、DTT、TCEP、チオグリコリシスなどのいくつかの還元剤がバッファーに追加されることがよくあります。

TCEPは3つの還元剤の中で最も安定していますが、最も高価です。通常、DTTは、精製プロセスにおいてバッファーに添加され、TCEPは、酵素溶液が最終的に保存されるバッファーに添加される。還元剤の濃度は一般に5〜10mMであり、娘タンパク質よりもはるかに高いはずです。 DTとチオグリコリシスは室温で分解するため、低温で還元剤と一緒にバッファーを保存するか、使用時に還元剤を追加する必要があります。

還元剤を使用するときは、カラムの材料がそれと互換性があることを確認する必要があります。たとえば、高濃度の還元剤はニッケルカラムの銀を剥ぎ取り、カラムの色を暗く茶色にします。ニッケルのコラムは再生することができますが、コラムの負荷は非常にaffになります"エクテッド"

安定剤

いくつかの安定剤を緩衝溶液に添加すると、タンパク質精製中のタンパク質の溶解度と安定性を改善するのに役立ちます。感情的なタンパク質BSAを緩衝液に加えると、標的タンパク質をある程度安定させることができますが、これらの添加された安定剤が実験を妨げないようにする必要があります。時々グリセロール、ポリエチレングリコールを加えるなどバッファーの粘度を高めるために、タンパク質の凝集を防ぐのに役立ちます。さらに、少量の界面活性剤と硫酸塩、アミノ酸、クエン酸などのいくつかのイオン化合物を使用すると、タンパク質間のイオン相互作用を回避し、タンパク質の溶解を助けることができます。

私たちは生物学的バッファーのメーカーです。現在、TRIS、TRIS-HCL、HEPES、MOPS、CAPS、BICINEなど、さまざまなシナリオで使用できる多くの種類の生物学的バッファーが製造されています。工場直接販売は、安定した品質、より手頃な価格、および大量の在庫を持っています。購入の瞬間に注文へようこそ!